雞蛋專用柱多農(nóng)殘多獸殘分析前處理方法儀器分析方法

更新時(shí)間：2022-07-04

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現(xiàn)行獸藥殘留檢驗(yàn)由于藥物種類多及化學(xué)特性差異大，針對(duì)禽畜產(chǎn)品檢驗(yàn)時(shí)需將藥劑分類以多種方法分別進(jìn)行檢測(cè)，惟每個(gè)方法需要較繁復(fù)步驟及較多溶劑用量，同一樣品為求檢驗(yàn)時(shí)效則無法針對(duì)太多項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，致無法提升檢驗(yàn)密度，只能選擇重點(diǎn)藥項(xiàng)進(jìn)行監(jiān)控；又基于樣品本身基質(zhì)特性差異，前處理方法于各類樣品基質(zhì)的適用性為一大挑戰(zhàn)。

當(dāng)今較普遍的前處理方法為固相萃取法（SPE柱法），處理一批樣品至少需數(shù)小時(shí)且需使用大量溶劑沖堤凈化；另有不少學(xué)者采用QuEChERs法進(jìn)行前處理，亦有很好的結(jié)果可供參考。

巨研科技公司以高效能綠色前處理技術(shù)為目標(biāo)，研發(fā)出一種應(yīng)用于食品中獸藥殘留檢驗(yàn)的快速萃取前處理技術(shù)—FaVEx（Fast Veterinary Extraction），為快速的獸藥殘留檢驗(yàn)前處理技術(shù)，此技術(shù)結(jié)合了一支ZL凈化管（SPE柱）加上簡(jiǎn)化的萃取步驟，達(dá)到節(jié)省時(shí)間與溶劑用量、操作簡(jiǎn)單及再現(xiàn)性佳之效果，并基于雞蛋樣品的特性，發(fā)展出FaVEx-NM-Egg快速萃取凈化套組應(yīng)用於雞蛋基質(zhì)中多重獸藥殘留量分析。

本研究以FaVEx-NM-Egg SPE柱（一步通過法獲取目標(biāo)物）分析雞蛋樣品中多種獸藥，與傳統(tǒng)獸藥殘留前處理技術(shù)相比，樣品前處理整體效率可提高10倍以上，因操作更簡(jiǎn)單，不須精密設(shè)備輔助，人力成本減少90%，有機(jī)溶劑的使用減少約90%，同時(shí)減少了廢棄物的產(chǎn)生。

此方法適用于雞蛋、蛋粉等雞蛋產(chǎn)品。

本篇搭配Agilent 6470液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，同時(shí)檢測(cè)添加濃度為5.0 ng/g、12.5 ng/g之雞蛋樣品中離子型抗球蟲藥等102項(xiàng)獸藥殘留，本篇定量極限可達(dá)5 ng/g，為快速、穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

分析結(jié)果如表所示，除Florfenicol（氟苯尼考）及lasalocid A（拉沙里菌素A）之外，其余100項(xiàng)藥項(xiàng)回收率均在50~120%范圍內(nèi)，變異系數(shù)（CV）介于0.1~21.6之間。

Item	Compound Name	中文名稱

1	5-Hydroxythiabendazole	5-羥基噻苯達(dá)唑
2	Albendazole	阿苯達(dá)唑
3	Albendazole-Sulfone	阿苯達(dá)唑砜
4	Albendazole-Sulfoxide	阿苯達(dá)唑亞砜
5	Amino albendazole sulfone	阿苯達(dá)唑氨基砜
6	Amprolium	氨丙啉
7	Azaperol	氮哌醇
8	Azaperone	氮哌酮
9	Carazolol	卡拉洛爾
10	Carbadox	卡巴氧
11	Chloramphenicol	氯霉素
12	Ciprofloxacin	環(huán)丙沙星
13	Clarithromycin	克拉霉素
14	Clindamycin	克林霉素
15	Clopidol	氯羥吡啶
16	Cyromazine	滅蠅胺
17	Danofloxacin	達(dá)氟沙星
18	DCBX	脫氧卡巴氧
19	Decoquinate	癸氧喹酯
20	Diclazuril	地克株利
21	Dicyclanil	環(huán)蟲腈
22	Difloxacin	雙氟沙星
23	Dimetridazole	地美硝唑
24	Enrofloxacin	恩諾沙星
25	Eprinomectin-Na	依普菌素
26	Febantel	非班太爾
27	fenbendazole	苯硫咪唑
28	Fleroxacin	氟洛沙星
29	Florfenicol amine	氟苯尼考胺
30	Florfenicol	氟甲砜霉素
31	Fluazuron	吡蟲隆
32	Flubendazole	氟苯咪唑
33	Flumequine	氟甲喹
34	Furaltadone	呋喃它酮
35	Furazolidone	呋喃唑酮
36	Halofuginone	鹵夫酮
37	Josamycin	交沙霉素
38	Kitasamycin	吉他霉素
39	lasalocid A	拉沙洛菌素
40	Levamisole	左旋咪唑
41	Lomefloxacin	洛美沙星
42	Maduramycin	馬杜霉素
43	Marbofloxacin	馬波沙星
44	Mebendazole	甲苯咪唑
45	Metronidazole	甲硝唑
46	Monensin	莫能菌素
47	Morantel	甲噻吩嘧啶
48	Nalidixic acid	萘啶酮酸
49	Narasin	那拉霉素
50	Neospiramycin I	新螺旋霉素
51	Nicarbazin	尼卡巴嗪
52	Nitrovin	雙呋脒腙
53	Norfloxacin	諾氟沙星
54	Novobiocin	新生霉素
55	Ofloxacin	氟嗪酸
56	Olaquindox	喹乙醇
57	Oleandomycin	竹桃霉素
58	Orbifloxacin	奧比沙星
59	Ormetoprim	奧美普林
60	Oxfendazole-Sulfone	磺唑氨酯
61	Oxolinic acid	惡喹酸
62	Pefloxacin	培氟沙星
63	Pipemidic acid	吡哌酸
64	Piromidic acid	吡咯酸
65	Pyrimethamine	乙胺嘧啶
66	Robenidine	氯苯胍
67	Ronidazole	羅硝唑
68	Salinomycin	沙利霉素
69	Sarafloxacin	沙拉沙星
70	Spiramycin I	螺旋霉素 I
71	Succinylsulfathizole	琥珀酰磺胺噻唑
72	Sulfabenzamide	磺胺苯酰
73	Sulfacetamide	磺胺醋酰
74	Sulfachlorpyridazine	磺胺氯噠嗪
75	Sulfaclozine	磺胺氯吡嗪
76	Sulfadiazine	磺胺嘧啶
77	Sulfadimethoxine	磺胺二甲氧嘧啶
78	Sulfadoxine	磺胺多辛
79	Sulfaethoxypyridazine	磺胺乙氧化吡嗪
80	Sulfaguanidine	磺胺脒
81	Sulfamerazine	磺胺甲基嘧啶
82	Sulfameter	磺胺對(duì)甲氧嘧啶
83	Sulfamethazine	磺胺二甲基嘧啶
84	Sulfamethizole	磺胺甲二唑
85	Sulfamethoxazole	磺胺甲基異惡唑
86	Sulfamethoxypyridazine	磺胺甲氧嗪
87	Sulfamonomethoxine	磺胺間甲氧嘧啶
88	Sulfapyridine	磺胺吡啶
89	Sulfaquinoxaline	磺胺喹惡啉
90	Sulfathiazole	磺胺噻唑
91	Sulfatroxazole	磺胺曲沙唑
92	Sulfisomidine	磺胺二甲異嘧啶
93	Sulfisoxazole	磺胺異惡唑
94	Tetramisole	四咪唑
95	Thiabendazole	噻苯唑
96	Thiamphenicol	甲砜霉素
97	Tiamulin	泰妙菌素
98	Tilmicosin	替米考星
99	Trichlorfon	敵百蟲
100	Trimethoprim	甲氧芐啶
101	Tylosin	泰樂菌素
102	Virginiamycin M1	維吉尼亞霉素M1

（一） 樣品制備流程

1.1 耗材與試劑

1%醋酸乙腈、無水硫酸鈉、高速振蕩機(jī)、離心機(jī)、FaVEx-NM-egg SPE柱、手壓或正壓壓柱機(jī)、濃縮儀、0.22um的濾膜。

1.2 前處理操作步驟

1.3 注意事項(xiàng)

1、 FaVEx-NM-egg SPE柱需要與10mL的一次性塑料注射器配合使用。

2、正壓凈化*：搭配正壓壓柱機(jī)使用，批量壓柱6只FaVEx-NM-egg凈化柱。

3、 *回溶液：甲醇/水 ( V / V = 6 / 4 )溶液。

4、**待測(cè)物LOQ要求較低時(shí)，可取濾液濃縮2-10倍；最大濃縮倍率：取5mL濾液，濃縮至近干后以500µL的回溶液回溶)。

5、推薦使用HPPE-48高通量真空加熱振蕩濃縮儀，快速自動(dòng)濃縮到近干，不放通風(fēng)櫥也沒有異味，或氮吹濃縮儀等同等功能的濃縮設(shè)備。

（二） 液相層析參考條件

移動(dòng)相流速：0.3 mL/min

層析管柱：ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18

內(nèi)徑3.0 × 150mm 1.8-Micron

流動(dòng)相溶液-A液：水+0.1%甲酸

流動(dòng)相溶液-B液：甲醇+0.1%甲酸

流動(dòng)相溶液：A液與B液以下列條件進(jìn)行梯度分析

分析儀器：1290/6470液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(Agilent)

*回溶液：甲醇/水( V / V = 6 / 4 )溶液

時(shí)間(min)	A(%)	B(%)
0.0	98	2
2.5	95	5
3.5	80	20
6.0	75	25
8.0	70	30
11.5	50	50
13.0	30	70
14.0	10	90
14.5	5	95
20.0	5	95
24.0	98	2

post time：4.0 min

表一、獸藥102項(xiàng)藥劑之多重反應(yīng)偵測(cè)模式參數(shù)

圖一、雞蛋樣品之102項(xiàng)多重獸藥LC/MS/MS-MRM圖譜（添加樣品濃度為5.0 ng/g）

圖二、雞蛋樣品之102項(xiàng)多重獸藥LC/MS/MS-MRM圖譜（添加樣品濃度為12.5 ng/g）

表二、以FaVEx-NM-Egg凈化雞蛋樣品萃取液之多重獸藥102項(xiàng)藥劑之回收率　
　　　和變異系數(shù) 　　

（添加5.0 ng/g、12.5 ng/g于雞蛋樣品）

（三） 結(jié)論

本研究以FaVEx-NM-Egg SPE柱分析雞蛋樣品中多種獸藥，與傳統(tǒng)獸藥殘留前處理技術(shù)相比，樣品前處理整體效率可提高10倍以上，因操作更簡(jiǎn)單，不須精密設(shè)備輔助，人力成本減少90%，有機(jī)溶劑的使用減少約90%，同時(shí)亦減少了廢棄物的產(chǎn)生。

雞蛋基于本身基質(zhì)特性與一般禽畜肌肉類樣品差異較大，FaVEx-NM-Egg SPE柱針對(duì)雞蛋類樣品提供更好的凈化及萃取效果，此方法適用于雞蛋、蛋粉等雞蛋產(chǎn)品。

本篇搭配Agilent 6470液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀，同時(shí)檢測(cè)添加濃度為5.0 ng/g、12.5 ng/g之雞蛋樣品中離子型抗球蟲藥等102項(xiàng)獸藥殘留（項(xiàng)目列表詳見表）。分析結(jié)果除Florfenicol（氟苯尼考）及lasalocid A之外，其余100項(xiàng)藥項(xiàng)回收率均在50~120%范圍內(nèi)，變異系數(shù)介于0.1~21.6之間。本篇定量極限可達(dá)5 ng/g，為快速、穩(wěn)定之檢驗(yàn)方法。

另有FaVEx-NM-egg凈化雞蛋基質(zhì)，檢測(cè)多種農(nóng)藥的藥劑清單，歡迎聯(lián)絡(luò)詢問。

雞蛋專用柱 多農(nóng)殘多獸殘分析前處理方法儀器分析方法

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